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常见问答
细胞培养的详细步骤
来源: 时间:2024-04-24
  1. 培养基和试剂准备

    • 根据需要,选择适合特定细胞类型的培养基,例如DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)或RPMI(Roswell Park Memorial Institute)等,并添加适当的补充物,如胎牛血清、人血清、生长因子和抗生素。
    • 确保所有培养基和试剂都是在无菌条件下操作,以防止细菌或真菌的污染。
  2. 培养器具准备

    • 使用无菌技术,消毒培养器具,如培养皿 培养瓶移液器 吸头离心管等。
    • 在无菌环境下操作,例如在生物安全柜中进行操作,以确保培养过程中的无菌性。
  3. 细胞解冻或传代

    • 如果使用冻存的细胞,将冻存管放入37°C的水浴中迅速解冻。
    • 解冻后,将细胞转移到含有适当培养基的培养瓶中,并轻轻摇动混合。
    • 如果需要传代,将细胞从旧的培养皿中收集,通过离心去除培养液,然后将细胞重新接种到新的培养皿中。
  4. 细胞计数和接种

    • 使用血细胞计数板或自动细胞计数仪等设备,对细胞进行计数。
    • 根据实验需要,确定适当的细胞接种密度,并将细胞接种到预先涂覆了培养基的培养皿或培养瓶中。
  5. 培养条件设置

    • 将培养皿或培养瓶放入细胞培养箱中。
    • 设置适当的培养条件,包括温度(通常为37°C)、湿度和CO2浓度(通常为5%),以促进细胞的生长和增殖。
  6. 培养液更换和维护

    • 定期更换培养液,以去除细胞代谢产物和提供新的营养物质。
    • 定期观察细胞的形态和生长状态,并确保培养条件的稳定性。
  7. 实验操作

    • 根据实验需要,在细胞达到适当的密度和状态后,进行相应的实验操作,如细胞分化、药物处理、基因转染等。
  8. 细胞收集和处理

    • 当需要收集细胞进行进一步实验或分析时,通过离心等方法收集细胞。
    • 根据实验要求,可以对细胞进行不同的处理,如细胞裂解、RNA/DNA提取等。
  9. 细胞冻存

    • 如果需要,将细胞进行冻存,以备将来的使用。
    • 使用适当的冻存液,如含有10% DMSO的培养基,冻存细胞,并储存在液氮罐中。

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