今天，我们来聊一聊PCR实验中的一个关键要素——耗材。作为PCR的常客，了解PCR耗材相关的特性和术语是很有必要的。
市面上的PCR耗材琳琅满目，品牌、规格、颜色等琳琅满目，令人眼花缭乱。让我们一步一步来了解它。
1.材料
通常，PCR耗材的原材料是聚丙烯。是一种良好的耐热惰性材料。工作温度范围为-30～140℃，使其能够承受PCR反应热循环过程中的热能变化，对PCR反应体系中的物质起到很好的密封和保护作用。
2. 颜色
常见的有白管和透明pcr管。 在传统的 PCR 实验中，两者没有区别。然而，在同一个实时/qPCR 实验中，对于具有顶端信号读取的 qPCR 仪器，白管相对更敏感和一致（参见下图 A 和 B）。 为什么是这样？
与透明管相比，A：白色管的 Ct 值较低；B：用白色管获得更好的重复性。
qPCR的核心数据是Ct值，而荧光信号是计算Ct值的数据源，因此管内的荧光能否完整传输到检测器非常重要。白色的管壁阻止荧光穿过管壁和折射（下图A），从而阻止荧光传输到加热模块（即放置管的金属孔壁）并被模块吸收或不一致反映。 与透明管相比，在白色管的尖端收集到了更强、更集中的荧光信号（下图 B）。
A：透明管和白管中荧光信号的变化趋势； B：加入等量荧光素后，荧光强度比较。
因此，如果您使用的是顶读 qPCR 仪器，不妨试试白色试管。
3.质量（精益或不精益 ）
这里强调了耗材质量的重要性。qPCR 耗材必须不含污染物和抑制剂。高压和辐射能够去除细菌和 DNase，但不能去除灰尘和 DNA 残留物，它们可能会抑制 PCR 反应或产生非特异性扩增。 物质具有吸光度，即使是微小的污染物也会吸收反应体系中的荧光，影响荧光信号的采集。实验的夸张版本用于证明杂质污染对实验的影响。如下图所示，在八联管的其中一个反应孔中放置了一个杂质。 正如预期的那样，扩增曲线显示出明显的异常。
↑ 反应管中的杂质
↑ 8管条重复反应结果，左井杂质使曲线“偏离”。
温馨提示：注意不要让耗材长时间暴露在空气中。取出耗材后，请务必迅速封好包装袋，避免徒手接触。 如果可能，请在超净工作台上操作。
4.容量/ 尺寸 / 通量
体积决定了可以加载多少样品（反应体积）。剂量过多可能导致传热效率降低、溢出或交叉污染； 而剂量不足可能会导致样品蒸发损失。 qPCR 仪器的加热模块还将确定适用的耗材和适用的反应系统尺寸。吞吐量很容易理解，它是单个实验中可以加载的最大样本数。常用容量和通量规格如下表所示：
容量规格通常也分为标准型和低型，如下所示。低调耗材的高度较低。这种短小的设计最大限度地减少了反应系统上方的空间（“死体积”——无用的部分），减少了热循环过程中蒸发的影响，并使加热模块能够更大程度地包裹它，以提高传热效率。 因此，低剖面管也称为“快速”管或板。
温馨提示：一般常用的反应体积为20 µL，推荐使用0.1 mL或小体积的小体积反应管。
5.管壁 厚度
管壁的厚度会直接影响导热系数。PCR 耗材应具有均匀的壁厚，以提供一致的热传递。 超薄管壁比标准版薄50%，进一步降低热障，带来更快更好的反应效果。 因此，为了最大限度地提高 PCR 反应的效率，确保反应稳定高效，均一且超薄的 PCR 耗材是最佳选择。
6. 透明度
qPCR的管盖和密封膜需要具有较高的光学透明度，以确保荧光信号的最佳穿透和传输，同时减少失真（适用于top-read qPCR仪器）。管壁的透明度越高，可能会影响实验结果。 原因上面已经解释过了。传统的 PCR 可以忽略这个特性。
7.裙板
PCR板的裙边是指板的周边延伸部分。 在构建反应系统时，该裙边可作为移液过程的稳定支撑，并在结合自动化工作站时提供机械强度和抓握力。 常见的有无裙、半裙和全裙三种（分别对应下图中的A、B、C）。
无裙板： 可用于大多数 PCR 或 qPCR 仪器，但不适用于自动化应用。在移液过程中容易移动，不是很稳定，需要与板架一起使用。
半裙板： 适用于具有良好移液稳定性的自动化应用。
全裙边板： 非常适合自动化应用。机械强度好，适用于带有突出模块的PCR仪器，移液过程中稳定性高。
Tips：裙边的意义更多的是便于工业化和自动化批处理，与机械臂相结合。 在传统的研究实验室中可能不需要它，无裙板就足够了。
8. 封口膜
PCR板密封膜由透明塑料或铝箔制成。 粘性透明膜较为常见，适用于96或384孔板，应具有足够好的透光率。 封膜时，会用小卡片将封孔周围的膜压紧，以免出现漏气等现象。
粘性铝膜可能不太常见。虽然不适用于qPCR，但它是光敏样品最理想的耗材。 因为它可以被打孔，所以便于PCR中的样品转移（对于传统PCR）。
总结
作为PCR系统的载体，耗材对于提高实验数据的质量非常重要。希望本次分享能够帮助您了解PCR耗材的一些小技巧，为更好地选择耗材提供帮助。