细胞培养是指在体外模拟体内环境，使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。在培养细胞时需要用到各种细胞培养耗材，其中细胞培养瓶是使用量比较大的一种。

细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以， 而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。

操作步骤

1. 吸除培养瓶内的旧培养液。

2. 向瓶内加入少许胰蛋白酶和EDTA 混合液，以能覆满瓶底为限。

3. 置恒温箱中 2~5 分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。

4. 吸除消化液，向瓶内注入 Hanks 液，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加 Hanks 液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用 Hanks 液冲洗，直接加入培养液。

5. 用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。

6. 计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置恒温箱中培养。

注意事项

1、 操作前要洗手，进入超净台后要用 75%酒精或 0.2%新洁尔灭擦试双手。试剂等瓶口也要擦试。

2、 点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜。

3、操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。

4、不能用手接触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。

5、 瓶子开口后要尽量保持 45℃斜位。

6、 吸溶液的吸管等不能混用。

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