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常见问答
PCR耗材选择的问答详解?
来源: 时间:2022-11-11

俗话说的好,工欲善其事,必先利其器。耗材的选择对得到满意的PCR实验结果至关重要。在分析PCR结果时,我们往往侧重于对引物、酶的浓度、温度和时间的分析,却忽略了PCR耗材也是影响因素之一。PCR耗材类型众多,如何选择合适的PCR耗材呢?下面几个问题可以帮你找到答案。

pcr耗材


1、PCR耗材为什么一般都是PP材质?

不管是普通的PCR还是实时荧光定量PCR(qPCR),通常其耗材会与试剂或样品直接接触,因而在生产制备过程中要求选用高质量的材料和良好的加工工艺。一般耗材都是选择聚丙烯(PP)材质。聚丙烯(PP)材质是生物学惰性材料,表面不易于粘附生物分子,且有着良好的化学耐性,及温度耐受性。


2、不同体积的PCR管/板,该怎么选?

PCR 管/板常见的体积:

• 单管/8连管/12连管:0.5mL、0.2mL、0.1mL

96孔板:0.2mL、0.1mL

• 384孔板:0.02mL

PCR 管/板的规格:

依据具体的实验要求选用合适的产品。PCR 管的体积大多数都可以满足 PCR 反应的要求。容量规格有标准容量和低容量可选,一般情况下推荐优先选用低容管。因为低容反应管/板有着较小的上方空间,可提高热传导率并降低蒸发。同时,在加样时需要避免加样过量或过少。过量会导致热传导率下降,溢出及交叉污染,而过少可能会造成样品蒸发损失。


3、单管或8联排管的平盖/凸盖有什么区别?

当样品量较少时,都会优先选用单管或者8联管。但是当反应体积需求较大时,单管占优势,体积可达 0.5 mL。单管和8联管有平盖和凸盖两种,各有优点。平盖可为qPCR提供精确的荧光信号传递;便于书写标记。凸盖与PCR仪盖接触,减少压力引起的管变形等;但会影响荧光信号传递,无法应用于qPCR实验。


4、不同的96孔板使用场景有什么不同?

96孔板一般分为无裙边板、半裙边板和全裙边板。

无裙边板:可适用于大多数的 PCR 仪或 qPCR 仪,但不适用于自动化应用。移液过程中稳定性不高,需要配合板托使用。

半裙边板:可适配标签或应用条码,及自动化应用,且有着较好的移液稳定性。

全裙边板:非常适用于自动化实验应用,也可适配标签及应用条码。机械强度较好,可适用于凸出模块的 PCR 仪,且移液过程中稳定性高。


5、PCR板/管材质是厚点的稳定性更好吗?

不是的。PCR耗材的管壁厚度要均一,才能提供一致的热传导。超薄管壁较标准版薄50%,可进一步减少热屏障,带来更快更好的反应效果。


6、对于 96 孔或者 384 孔板,为什么切角和标识都不是很相同呢?

切角:PCR 板的切角位置选择取决于适配仪器要求,便于定位。

标识:PCR 板的数字字母标记有助于识别单个孔及样品位置。一般为凸出的颜色数字标识或者印刻标识。对于一些自动化应用实验,印刻标记的反应板密封性会更好。


7、有的PCR 板孔是凸出的,有的却是平的呢,哪个更好?

适合的才是好的。常见的 PCR板 有平孔缘和加高孔缘两种。平孔缘的反应板,可适用于大多数的 PCR 仪。升孔缘的反应板,便于封膜,可降低样品间的交叉污染风险。


8、不同颜色的PCR管/板,该怎么选?

对于普通的PCR反应选用透明的就可以。在实时PCR反应时,白管的灵敏度和一致性相对更高。白色管壁能够阻止荧光穿过管壁和折射,进而防止荧光传至加热模块,被模块吸收或发生不一致反射等情况。相比于透明管,在白管的顶端能够采集到更强,更聚焦的荧光信号。


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